امتزاج و همسانه سازی نواحی اتصال دهنده نوروتوکسین های بوتولینوم تیپ aوb

نوروتوکسین های بوتولینوم (bonts) توکسین های باکتریایی نیرومندی هستند که در غلظت های فمتومولار با جلوگیری از آزاد شدن انتقال دهنده عصبی استیل کولین سبب ایجاد فلج عضلانی شل می گردند. هر نوروتوکسین متشکل از یک زنجیره سبک 50 کیلودالتونی و یک زنجیره سنگین100 کیلو دالتونی است. ناحیه انتهای کربوکسیلی زنجیره سنگین که سبب اتصال نوروتوکسین به گیرنده های ویژه سطح سلولی می گردد ناحیه اتصال دهنده نام گذاری شده است. این ناحیه از توانایی ایمنی زایی قابل ملاحظه ای نیز برخوردار است. در این مطالعه ژن های نواحی اتصال دهنده ی نوروتوکسین تیپ های a و b به منظور تولید پروتئین نوترکیب کایمر به عنوان کاندید واکسن دو ظرفیتی به یگدیگر متصل شدند. بدین منظور از ژن های صناعی نواحی اتصال دهنده ی نوروتوکسین های تیپ a و b در حامل بیانی pet28a (+)استفاده شد. برای ژن ناحیه اتصال دهنده ی نورتوکسین بوتولینوم تیپ b پرایمر پیشرو حامل جایگاه برشی ncoi و پرایمر پیرو حامل جایگاه برشی ndei طراحی گردید. با استفاده از آنزیمpfu ، ژن یاد شده مورد تکثیر قرار گرفت. در مرحله بعد برش آنزیمی محصولات pcr و ناقل نوترکیب حاوی ژن ناحیه اتصال دهنده ی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a با استفاده از آنزیم های ncoi و ndei انجام شد. سپس با استفاده از آنزیم t4 dna ligase الحاق ژن مورد نظر در ناقل pet28a (+) حاوی ژن ناحیه اتصال دهنده ی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a انجام گرفت. در مرحله آخر، حامل نوترکیب حاوی ژن کایمر به باکتری e.coli dh5α انتقال داده شد. نتایج pcr ، برش آنزیمی و تعیین توالی سازه ی نهایی بیانگر صحت اتصال دو ژن به یکدیگر بود.